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仪器之家 2020-03-13 14:12 各自安好

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细胞裂解后将含核酸的水相离心分离,并且将等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1体积)混合液加入其中。按照应用目的,两相通过简单颠倒混匀(适用于分离高分子量核酸)或者漩涡振荡混匀(适用于分离小分子量核酸)之后离心分离,核酸被留于上层水相,而疏水性的蛋白质被分配至有机相。酚是一种有机溶剂,为了防止未饱和的酚会吸取水相而将一部分核酸带走,因而需要预先用STE缓冲液将其饱和。酚也容易被氧化,而被氧化的酚会导致核酸链交联或者会使核酸链中磷酸二酯键断裂,所以在制备酚饱和液时需要将一特殊物质加入,从而避免酚被氧化。

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